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PCR实验室辅料如何质检?

来源:正一 浏览人数:40 次更新时间:2021.04.05

辅料质检的准则

辅料的质检通常是在新一批的辅料到实验室后统一做一次或者定期(半年或1年)做,因而质检就包含了验货和质检2个局部。由于辅料的质检没有一个统一的规范,普通由各实验室自行制定,可简可繁,这里提出一些办法供大家参考。

1.外包装检查:外包装应完好无损无污,标识分明,检查品名、品牌,货号,规格、消费日期,有效期、保管条件等信息。

2.内包装检查:内包装物品应与外包装标识分歧,检查能否有破损,走漏,内容物能否齐全,能否有相应的运用阐明书等。

3.性能质检:检测试剂耗材能否与其性能分歧,比方吸头的精确性和气密性等

4.污染物质检:检测试剂耗材能否被常规检测项目的待检物污染,这种污染可能是物品消费环节,也可能是运输或实验室的保管过程中被污染。

5.抑止物质检:检测试剂耗材中能否存在PCR的抑止物,比方核酸酶。

辅料质检的前提条件

1.弱阳性质控:需求准备弱阳性质控,包括规范物质、第三方质控或弱阳性样品用于停止性能质控和抑止物质控。

2.阴性质控:需求准备肯定阴性的样品或空白对照,用于停止污染物的质控。

常见辅料的质检

辅料的质检应分离实践工作中可能用到的场景,并非越苛刻越好,需求每个实验室分离本身状况来设计和调整文中提到的参数。

离心管

(1)、渗漏密闭性:将n个离心管参加半量墨汁,盖好盖子后放入水中,浸泡30min,没有墨汁渗出为合格。

(2)、离心密闭性:将n个离心管参加半量纯水,放入离心机,10000 rpm,30min,管盖未崩开未漏液为合格。

(3)、热密闭性:将n个离心管参加半量纯水,盖好盖子称重后放入金属浴中,65℃或90℃(巴氏消毒),30min,再停止称重,离心管未变形,管盖未崩开未漏液,前后重量未变化为合格。。

(4)、冷密闭性:将n个离心管参加半量纯水,放入-20℃冰箱,24h,离心管未变形,管盖未崩开未漏液为合格。

(5)、污染物质检:将n个离心管分别参加半量阴性纯水,盖好盖子涡旋1 min后静置5min,汲取纯水作为模板停止扩增,qPCR无扩增为合格。

(6)、抑止物质检:将n个离心管分别参加弱阳性质控物,室温静置5min,然后停止提取;RNA核酸,DNA核酸,室温静置5min,作为模板停止扩增,qPCR扩增未被抑止为合格。

PCR管

(1)、渗漏密闭性:将n个PCR管参加半量墨汁,盖好盖子后放入水中,浸泡30min,没有墨汁渗出为合格。

(2)、离心密闭性:将n个PCR管参加半量纯水,放入离心机,1000 rpm,30min,管盖未崩开未漏液为合格。

(3)、热密闭性:将n个PCR管参加半量纯水,盖好盖子称重后放入PCR仪,设置一个常用的PCR程序,程序运转终了后,再停止称重,PCR管未变形,管盖未崩开未漏液,前后重量未变化为合格。

(4)、冷密闭性:将n个PCR管参加半量纯水,放入-20℃冰箱,24h,离心管未变形,管盖未崩开未漏液为合格。

(5)、污染物质检:将n个PCR管参加半量阴性纯水,盖好盖子涡旋1 min后静置5min,作为模板停止扩增,qPCR无扩增为合格。

(6)、抑止物质检:将n个PCR管分别参加弱阳性质控物,室温静置5min,然后停止提取;RNA核酸,DNA核酸,室温静置5min,作为模板停止扩增,qPCR扩增未被抑止为合格。

(7)、空白荧光通透性:关于qPCR,需求调查PCR管能否有非特异性荧光信号,将n个空PCR管,盖好盖子后放入PCR仪,设置一个常用的PCR程序,程序运转终了后,qPCR无扩增为合格。

(8)、阳性荧光通透性:关于qPCR,还需求调查PCR管能否会抑止荧光的通透性,将n个含弱阳性样品和扩增试剂的PCR管,与确认无荧光干扰的PCR管,盖好盖子后放入PCR仪一同扩增,设置一个常用的PCR程序,程序运转终了后,qPCR扩增未被抑止为合格。

吸头

(1)、精确性:将n个吸头分别汲取定量的纯水称重,重量与体积的关系依照1 g/mL换算。

(2)、气密性:取n个吸头,汲取最大量程的含有1%甘油的墨水,察看有色液体不呈现在滤塞之上,液面相同为合格。

(3)、防气溶胶性能:取n个吸头,汲取阳性核酸,重复吹吸10次,换另一个新吸头在阴性纯水中重复吹吸10次,取阴性纯水作为模板停止扩增,qPCR无扩增为合格。

(4)、污染物质检:取n个吸头,汲取阴性纯水重复吹吸10次,取阴性纯水作为模板停止扩增,qPCR无扩增为合格。

(5)、抑止物质检:取n个吸头,汲取弱阳性质控物重复吹吸10次,然后停止提取;汲取RNA核酸和DNA核酸重复吹吸10次,作为模板停止扩增,qPCR扩增未被抑止为合格。

采血管、采样管、采样拭子和一次性吸管

(1)、污染物质检:将n个耗材参加一定量阴性纯水,盖好盖子涡旋1 min后静置30min,汲取纯水作为模板停止扩增,qPCR无扩增为合格。

(2)、抑止物质检:将n个耗材分别参加弱阳性质控物,室温静置30min,然后汲取质控物停止提取;作为模板停止扩增,qPCR扩增未被抑止为合格。

无核酸酶水、PBS等缓冲液

(1)、PH值:丈量各缓冲液的PH值。

(2)、污染物质检:汲取缓冲液作为模板停止扩增,qPCR无扩增为合格。

(3)、抑止物质检:将缓冲液分别与RNA核酸和DNA核酸混合,然后汲取混合液作为模板停止扩增,qPCR扩增未被抑止为合格。

移液器和离心管架及离心机的内表

(1)、外表核酸污染:用沾湿的拭子擦拭上述物品的表面面,然后浸泡到纯水中10min,汲取纯水作为模板停止扩增,qPCR无扩增为合格。

(2)、移液器内腔核酸污染:关于常用的移液器的内部,可运用无滤芯的吸头在阴性纯水中吹吸10次后,汲取纯水作为模板停止扩增,qPCR无扩增为合格。

(3)、细菌污染:用沾湿的无菌拭子擦拭上述物品的表面面,划琼脂平板,每个平板的菌落数不应超越一定数量(我也不肯定几适宜,由于不请求无菌操作一定会有细菌,但是也不应该太多)。


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