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PCR实验室核酸污染避坑指南《一、核酸气溶胶污染的来源》

来源:正一 浏览人数:56 次更新时间:2022.10.20

结合我们3年的临床经验, 

总结了PCR实验室核酸污染避坑指南!





、核酸气溶胶污染的来源



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01

阳性质控品

较常见,发生概率在40%~60%之间;以重组质粒作为阳性质控品,发生污染的概率更大;

以构建的假病毒或重组病毒作为阳性质控品,参与核酸提取的过程中,也容易发生气溶胶污染;在试剂的配制过程中,接触了污染的容器、移液器、枪头、溶液,核酸气溶胶等,导致试剂被污染。

笔者认为,这是目前实验室引起的核酸污染最主要原因!

核酸采样亭

02

PCR扩增产物

尤其是是第一代PCR技术,发生概率在60%以上;PCR产物经反复多次的扩增,其复制量远远超过PCR的检测极限。

一个气溶胶所包含的拷贝数可以在104~106copies,因此即使是极微量的污染也足以造成实验结果假阳性。

但是,在采用了UNG/UDG防污染的PCR产品中,扩增产物引起的污染概率降至10%左右。

PCR扩增管的密封性是预防扩增产物污染的关键。如果密封不严,扩增完成后有蒸发现象,液面不整齐,或者扩增过程中有“炸管”声音。

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03

待测强阳性样品

发生概率在10%~30%之间。

放置样品的容器被污染或由于容器密封不严导致样品与外界接触被污染;待提取样本中含有强阳性样本,其提取的样品中含有高浓度的阳性核酸,形成气溶胶造成污染。

气溶胶是由空气与液体表面摩擦而产生的。开盖、晃动、加样器的反复抽吸等开放式操作,形成核酸气溶胶从而导致核酸污染。

以上核酸污染来源,均可形成气溶胶扩散至空气中,或直接吸附到物体表面。因此,应尤其重视由气溶胶导致污染的问题。重度污染假阳性的ct值可在24左右,中度污染ct值在30左右;轻度污染ct值在33左右。

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从核酸污染的分布来看主要在2个地方:

1、空气中的核酸气溶胶污染物:弥散到实验室各个角落,比较棘手;

2、物表的核酸污染物:移液器离心机核酸提取仪、传递窗、PCR仪、拆开的试剂盒、枪头盒、打开的耗材等表面

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